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細胞傳代
細胞密度達到80%~90%時.去培養基,10ml pbs清洗2次。加入3ml含0.25%edta的胰蛋白酶,人ips細胞相關,放人細胞培養箱3min。加人1ml dmem完全培養基終止胰酶消化,轉移至15ml離心管。
加入10ml pbs清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmx2min,棄上清液。再加入10ml pbs(經高壓滅菌,保存于40c),吹勻,吸取10微升進行計數,按照1×106/盤接種,在含5%co2的細胞培養箱繼續培養。
ips細胞這一名詞,全稱為誘導性多能ips(induced pluripotent stem cell),縮寫名來源于各個英文單詞的首字母。
胚胎ips的獲取,不可避免的要嚴重的傷害乃至殺1死胚胎,這在很多國家已經是法律上的殺1人罪行了。所以,胚胎ips的相關研究在各國都受到嚴格監管,實質上陷于停頓,而ips細胞就不存在這樣的倫1理問題,無需受精卵或胚胎,僅僅是提取一些體細胞,就可以將其轉化為與胚胎ips相同的多能細胞,可謂是巨大的進步了。
動物細胞培養
高速冷凍離心機在所有的細胞離體培養中,困難的是動物細胞培養。下面是它所需要的特殊條件。
⑴血1清:動物細胞離體培養常常需要血1清。相對常用的是小牛血1清。血1清提供生長必需因子,如激1素、微量元素、礦物質和脂肪。在這里,血1清等于是動物細胞離體培養的天然營養液。
⑵支持物:大多數動物細胞有貼壁生長的習慣。離體培養常用玻璃,塑料等作為支持物。
⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細胞培養過程中不斷進行調節,不斷維持所需要的氣體條件。
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