快切酶-友名生物(在線咨詢)

限制性內切酶已有百余種，每種酶有其特定的核苷酸序列識別特異性，酶的活性需mg 2來激1活。不同的酶也有許多差別：有些酶除需mg 2外，還需atp 等其他輔助因子的激1活;切割位點和識別序列間的距離不同;有的內切酶同時具有甲1基化作用。根據這些差別，可將限制性內切酶分為i、ii 和iii 種類型。ii 型限制性內切酶只需要二價鎂離子的激1活，酶在其識別序列內切割雙鏈dna，產生的各種dna部分片段具有相同的末端結構，而且大多數的ii 型酶可提供粘性未端，有利于片段再連接，大部分ii 型酶所識別的序列具有反向對稱的結構，或稱之回文結構。如ecori 和hindiii 的識別和切口分別為：
ecori ： g ↓aatt c hindiii ： a↓agct t
t tcga↑ a c ttaa↑g
非特異性內切酶鑒定
為鑒定非特異性內切酶污染，限制性內切酶與缺少該酶識別序列的超螺旋dna底物溫育。對于rf i型dna(超螺旋形式)，快切酶，一個單一的非特異性缺口就會將它轉變成rf ii型dna(帶缺口環狀)。小份的限制性內切酶與1μgdna在50μl反應體系中，采用推薦的nebuffer，在推薦的溫度下溫育4小時。兩種形式的dna在瓊脂糖凝膠上很容易區分，可以計算出從rf i 到 rf ii的轉化率。
限制性酶切分析法
限制性酶切分析法是指*組或一段核酸用限制性內切酶消化產生的片段經電泳等方法分離形成特別的條帶圖譜，對dna序列的特征進行的分析。限制性酶是生物體內能識別并切割特異的雙鏈dna序列的一種內切核酸酶。它是可以將外來的dna切斷的酶，即能夠限制異源dna的*并使之失去活力，但對自己的dna卻無損害作用。
限制酶是*工程中所用的重要切割工具。科學家已從原核生物中分離出了許多種限制酶，并且已經商品化，在*工程中廣泛使用。根據限制酶切割的特點，可將它們分為兩大類：一類是切割部位無特異性的；另一類是可特異性地識別核苷酸序列，即只能在一定的dna序列上進行切割。
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