極敏型 ECL化學發光底物試劑盒

極敏型 ecl化學發光底物試劑盒
ultra-sensitive enhanced chemiluminescence substrate kit
試劑盒組成：
貨號
組份
數量
ecl-f-100
a 液
50ml
b 液
50ml
說明書
1 份
ecl-f-500
a 液
250ml
b 液
250ml
說明書
1 份
儲存：建議置于4 ºc避光保存，一年穩定。
一、產品簡介：
本試劑盒是化學發光系統，用于檢測固定在膜上的蛋白或核酸，靈敏度高，背景低，檢測靈敏度可達低飛克(femtogram)級乃至飛克級以下，適用于檢測極痕量蛋白或核酸。發光信號持續時間較長，半小時以后仍可維持75%的發光，便于反復曝光操作。與其他 ecl 化學發光底物相比，可顯著減少樣本及一抗和二抗的使用量。
二、原理：
極敏型ecl化學發光底物試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶（hrp）的抗體、抗原或者核酸。蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上，以hrp標記的抗體或探針結合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于用本產品配制的ecl工作液中，室溫孵育數分鐘，hrp使工作液中的魯米諾（luminol）氧化并發光，試劑中添加的增強配方可以使這種發光得到極大增強，從而能夠檢測更低表達量的蛋白質或核酸。此光經x光膠片或者電子裝置感光記錄下來，可清晰顯示蛋白質或核酸條帶。
三、產品優點：
低飛克級靈敏度——極高的靈敏度，能快速檢測更廣泛的蛋白范圍，可檢測低飛克級乃至飛克以下的蛋白量。
信號穩定——發光時間較長，能進行多次曝光，半小時以后仍可維持75%的發光。
信號強——發光信號比對碘苯酚增強的 hrp-魯米諾檢測體系得到極大增強。
穩定性較高——試劑盒可在4度穩定存放一年。
節約抗體——需要更少（稀釋更多）的一抗和二抗，特別節省抗體(建議用量：一抗0.01-0.2 μg/ml，二抗2-10 ng/ml)。
四、使用方法：
1. 印跡膜制備：執行常規電泳、轉膜、hrp標記的抗體或者hrp標記的核酸探針孵育、洗膜；ecl工作液含有hrp催化的發光底物，檢測系統必須基于hrp酶標記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要，所有步驟均在室溫下完成。
2. ecl工作液的配置：在使用前取等量a液和b液，充分混勻后盡快使用；將膜片置混合液中，于室溫下孵育約2分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片，注意不要在膜片表面形成氣泡。
3.蛋白或核酸信號顯現：
1). 用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑，僅留下少量液體覆蓋表面，不可讓膜完全干燥；
2). 將膜片置于保鮮膜上，吸附蛋白面朝上，小心趕盡氣泡；
3). 用電子裝置感光，或在暗室中用x光片曝光；
4). 根據信號強弱適當調整曝光時間，也可選擇不同時間多次曝光，以取得更佳效果。
五、安全性：
無特殊毒性，按普通化學品處理。如果不慎與眼、皮膚和衣物接觸，請立刻用大量清水沖洗。
六、注意事項：
1．由于不同品牌的抗體質量不同，以及抗體的保存條件和保存時間的不同，初次使用時建議對抗體用量進行優化，以取得更優效果。
2．勿將ecl化學發光底物試劑盒暴露在陽光或強光下，否則易導致其失活；建議保存在棕色瓶中，并避免長時間暴露在陽光下，實驗室光照對試劑盒影響不大；除了x光膠片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作。
3．使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤狀態；使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產生。
4．使用前配制ecl工作液，體積足夠覆蓋膜片即可；取a液和b液時一定要用不同的槍頭，互相污染可能導致緩慢失活；配制完畢建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低；棄去使用過的混合試劑。
5．印跡膜與ecl工作液孵育后約3 min時發出的熒光更強，隨后熒光會隨著時間的延長而緩慢減弱，至30 min仍可保持約75%的光信號；蛋白點熒光較弱時可以適當延長曝光時間；使用過少的ecl工作液不利反應進行，為達節約目的可將膜剪小，但勿降低ecl工作液使用比例。
6．使用生物素/親和素體系時，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因為脫脂奶粉中含有多種內源性生物素，容易產生非特異性信號。
7. 避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
8. 金屬氧化物顆粒可能會造成膜上出現顆粒狀斑點，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。