百螢 Helixyte? iFluor 350 核酸標(biāo)記染料?實驗方案

一.百螢 helixytetmifluor 350概述
helixyte? ifluor 350 核酸標(biāo)記染料是我們 helixyte 核酸標(biāo)記和綴合技術(shù)的關(guān)鍵成員之一。由于核酸分子中缺乏反應(yīng)性部分，標(biāo)簽/半抗原與核酸的標(biāo)記/綴合一直非常具有挑戰(zhàn)性。胸腺嘧啶和鳥苷經(jīng)常被探索用于核酸綴合，例如光交聯(lián)（通過補骨脂素與胸腺嘧啶）或鳥苷的化/尤氏標(biāo)記。然而，這些現(xiàn)有的綴合要么繁瑣，要么需要嚴(yán)格的條件且產(chǎn)量低，因此不適合常規(guī)實驗室使用。在類似條件下，我們的 helixyte 核酸標(biāo)記和綴合技術(shù)易于使用，產(chǎn)量高。 helixyte? ifluor 350 核酸標(biāo)記染料提供了一種特的方法，通過簡單的混合步驟將 ifluor 350 熒光團附著到核酸上。標(biāo)記試劑很容易與鳥呤的n7反應(yīng)形成穩(wěn)定的共價鍵。貼標(biāo)過程簡單、快速、產(chǎn)量高。標(biāo)記的核酸與未反應(yīng)的染料的分離可以通過簡單的乙醇沉淀、旋轉(zhuǎn)柱或透析來完成。由此產(chǎn)生的標(biāo)記 dna/rna 探針具有明亮的藍(lán)色熒光，可以使用 amca/alexa fluor 350 濾光片組輕松檢測到。它們可用于斑點、northern 和 southern 印跡、rna 和 dna 原位雜交、多色熒光原位雜交 (mfish)、比較基因組雜交 (cgh) 或微陣列分析等。
二.百螢 helixytetmifluor 350參數(shù)
ex(nm)
345
em(nm)
450
分子量
n/a
溶劑
dmso
存儲條件
在-15℃以下保存，避免光照
三.百螢 helixytetmifluor 350實驗方案
樣品分析方案
概述
將 dna 與 helixyte? ifluor 350 核酸標(biāo)記染料儲備溶液混合
37°c 孵育 1 小時
根據(jù)下游應(yīng)用的需要進(jìn)行純化。
溶液配制
除非另有說明，所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等份，并在制備后儲存在-20°c。避免反復(fù)凍融循環(huán)
打開小瓶之前，請在室溫下解凍 helixyte? ifluor 核酸標(biāo)記染料。短暫離心以收集干燥的沉淀
制備 helixyte? ifluor 核酸染料儲備溶液
1.將 110 μl dmso 添加到 helixyte? ifluor 350 核酸標(biāo)記染料小瓶中，制備 10 mm 儲備溶液。
注意：建議將任何未使用的儲備溶液分成一次性等份。將等分試樣儲存在 ≤-20 ℃ 下并避光。避免反復(fù)凍融循環(huán)。
操作步驟
1.根據(jù)下表1中的信息準(zhǔn)備標(biāo)記反應(yīng)。
表 1. 標(biāo)準(zhǔn)核酸標(biāo)記反應(yīng)。
組分
添加到反應(yīng)中的體積
終濃度
dna (1 mg/ml)
2 to 5 μl
2 to 5 μg
helixyte? ifluor 350 核酸標(biāo)記染料儲備液
0.5 μl
50 μm
te 緩沖液（ph 8 至 8.5）
添加足夠的緩沖液以將體積調(diào)整至 100 μl
注意：此 dna:染料比例可產(chǎn)生適合大多數(shù)應(yīng)用的標(biāo)記效率。可根據(jù)應(yīng)用要求調(diào)整 helixyte? ifluor 350 核酸標(biāo)記染料的量或反應(yīng)孵育時間，以修改標(biāo)記密度。優(yōu)化 dna 與染料的比例以獲得高的標(biāo)記率
2.避光、37℃孵育反應(yīng)1小時。
注意：孵育 30 分鐘后，短暫離心反應(yīng)，以盡量減少蒸發(fā)的影響并保持反應(yīng)組分適當(dāng)?shù)臐舛取?br>注意：或者，反應(yīng)可以在室溫下孵育 2 小時。為了獲得的標(biāo)記條件，我們建議在 37℃ 下孵育。
3.孵育后，可以純化標(biāo)記混合物以去除任何游離的標(biāo)記染料。有關(guān)說明，請參閱下面的“用酒精沉淀純化標(biāo)簽混合物”部分
用酒精沉淀純化標(biāo)簽混合物
1.將 0.1 體積 (10 ul) 5m 氯化鈉和 2 - 2.5 體積冰冷的 ** 乙醇 (250 ul) 添加到反應(yīng)中。充分混合并在 ≤ -20°c 下放置至少 30 分鐘。
2.在冷凍微量離心機中全速 (>14,000 x g) 離心 15-30 分鐘，沉淀標(biāo)記的核酸。沉淀后，用微量移液器小心地除去乙醇。不要打擾顆粒。
注意：少量核酸可能難以看到。在微量離心機中標(biāo)記并定向含有沉淀物的管，以便沉淀將在預(yù)定位置形成。
3.用 500 μl 室溫 70% 乙醇清洗沉淀一次。再全速離心 15-30 分鐘。
4.用微量移液器除去所有乙醇痕跡。不要讓樣品干燥過 5 分鐘，因為沉淀可能會變得難以重新懸浮。
5.用約 30 μl 無菌水重懸標(biāo)記的 dna。
6.儲存純化的、標(biāo)記的核酸以供長期保存或置于冰上以便立即使用。
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